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細菌的接種與分離技術方法介紹

2023-07-19 9:54 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
(一)平板劃線分離法

在被檢標本中,常混雜有多種細菌,平板劃線分離法可使這多種細菌在培養基表面分散生長,各自形成菌落,以便根據菌落的形態及特征,挑選單個菌落進行純培養。常用的平板劃線分離法有以下兩種:

1.連續劃線分離法 此法主要用于雜菌不多的標本。用接種環取標本少許,于平板1/5處密集涂布,然后來回作曲線連續劃線接種,線與線間有一定距離,劃滿平板為止。

2.分區劃線分離法 本法適用于雜菌量較多的標本。先將標本均勻涂布于平板表面邊緣一小區(第一區)內,約占平板1/5面積,再在二、三、……區依次連續劃線。每劃完一個區,均將接種環滅菌一次。每一區的劃線均接觸上一區的接種線2~3次,使菌量逐漸減少,以獲得單個菌落。

(二)斜面接種法

該法主要用于單個菌落的純培養、保存菌種或觀察細菌的某些特性。用滅菌的接種環取單個菌落或少許細菌,從培養基斜面底部向上劃一條直線,然后從底部向上作連續曲線劃線,一直劃到斜面頂端。

(三)液體接種法

多用于一些液體生化試驗管的接種。用滅菌接種環取菌少許,在試管內壁與液面交接處的管壁上輕輕研磨,使細菌混合于培養液中。

(四)穿刺接種法

此法主要用于半固體培養基、明膠及雙糖管的接種。用接種針取細菌少許,從半固體培養基中央,平行于管壁垂直刺入,接近管底但不可接觸管底,然后接種針沿原路退出。

(五)傾注平板法

測定牛乳、飲水和尿液等標本細菌數時常用此方法。將標本經適當稀釋后,取一定量加入已滅菌的平皿內,傾入已溶化并冷卻至45℃左右的定量培養基,混勻,待凝固后倒置、培養。根據培養基內的菌落數和稀釋倍數,即可計算出標本的細菌數。

(六)涂布接種法

常用于紙片法藥物敏感性測定,也可用于被檢標本中的細菌計數。加定量的被檢菌液于瓊脂平板表面,然后用滅菌的L型玻璃棒反復涂布幾次,使被檢物均勻分布在瓊脂表面,然后貼上藥敏紙片培養,或直接培養觀察結果。
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