【紅細胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×)】信息簡介

【信息說明】

產品名稱：紅細胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×)

規格：100ml/500ml

供應商：遠慕生化試劑廠家

分類：細胞組分分離

儲存條件：4℃,12個月

用途：去除細胞懸液中的紅細胞,屬于溶解紅細胞方法的一種

主要成分：無菌溶液；主要由10mM PBS、氯化鈉、氯化鉀等組成。經高壓滅菌處理。

【操作步驟】

注意：絕大多數情況下，應使用無菌去離子水稀釋RBC Lysis Buffer(10×)至1×使用，流式細胞術除外。

A、組織細胞樣本的常規操作

1、制備細胞懸液: 新鮮組織經過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當方法制備成細胞懸液，離心棄上清。

2、裂解: 加入1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1～2min。 3、離心，棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發現紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2和步驟3各一次。

5、洗滌：根據實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃離心，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。

B、組織細胞樣本的快速操作(無需洗滌)

1、制備細胞懸液：新鮮組織經胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，制備細胞懸液，離心棄上清。

2、裂解：加入細胞5倍細胞沉淀體積的1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻裂解。

3、加入PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液，輕柔混勻。

4、離心5min，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作。

5、如果發現紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2～4各一次。

6、根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數、培養等后續實驗。

C、血液樣本的常規操作

1、取新鮮抗凝血，離心，棄上清。

2、 裂解：加入1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1～5min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

3、離心：棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發現紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2和步驟3一次。

5、洗滌： 根據實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液，輕柔混勻重懸沉淀；4℃離心，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。

6、根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數、培養等后續實驗。

D、血液樣本的快速操作(無需洗滌)

1、新鮮抗凝血中加入10倍體積的1×RBC Lysis Buffer，輕輕吹打混勻，裂解4～15min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

2、加入 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液，輕柔混勻。

3、離心，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4、如果發現紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2和步驟3一次。

5、根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數、培養等后續實驗。

紅細胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×)

【注意事項】

1、制備細胞懸液時應根據實驗需要，不一定要制備成單細胞懸液。

2、后續試驗如果是用于細胞培養，操作過程中應注意無菌操作，盡量在超凈工作臺內操作。

3、離心步驟盡量在4℃離心機上操作。

4、常規步驟與快速步驟的區別在于：常規步驟多了一步洗滌過程的離心，可以節省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管;快速步驟少了一次離心過程，洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。

5、離心洗滌后，通常極微量的紅細胞不會影響后續的檢測。

6、如果經過1×RBC Lysis Buffer處理后的樣品后續用于總RNA的提取，在處理細胞時不必使用DEPC處理的溶液，即無需在該操作中特意去除RNase。

7、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

【簡介說明】

去除紅細胞的方法有多種，如ACK Lysis Buffer、Tris-氯化銨紅細胞裂解液、Gey's Lysis Buffer。紅細胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)是一種從人、鼠或其他哺乳動物等體內的組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細胞的溶液，其主要有效成分為NH4Cl。 RBC Lysis Buffer(10×)配方經過優化不同于ACK Lysis Buffer，在裂解無核紅細胞的同時幾乎不損傷淋巴細胞(Lymphocyte)或其它有細胞核的細胞。該裂解液經過濾除菌，為10×的濃縮液，使用1×RBC Lysis Buffer處理過的血液或組織細胞樣品可以用于后續的細胞培養、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規的分析和檢測，尤其適用于流式細胞檢測或需要高濃度裂解液的情況。

標簽：紅細胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×)

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