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抗體標記簡介：
抗體標記是指將標記物（酶，熒光素，生物素等）共價連接到抗體上，與待檢測物（如某些特定抗原）特異性反應形成多元復合物，并借助于熒光顯微鏡、射線測量儀、酶標檢測儀、電子顯微鏡和發(fā)光免疫測定儀等精密儀器對試驗結果直接鏡檢觀察或進行自動化測定，可以在細胞、亞細胞、超微結構及分子水平上對抗原、抗體反應進行定性和定位研究或應用各種液相和固相免疫分析方法對體液中的半抗原、抗原進行定性和定量測定。目前抗體標記技術己被廣泛用于醫(yī)學病理學、免疫組織化學、分子生物學、生物制藥等領域的分析研究與技術測定，常見的抗體標記技術包括酶標記法，生物素化標記法，熒光素標記法和膠體金標記法等。

常用的抗體標記技術：

1.抗體的酶標記法
通過共價鍵經(jīng)適當方法將酶聯(lián)結在抗體上，制成酶標抗體，再借酶對底物的特異催化作用，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，這些有色產(chǎn)物可用肉眼、光學顯微鏡和電子顯微鏡觀查，也可以用分光光度計測定，呈色反應顯示了酶的存在，從而證明發(fā)生了相應的免疫反應。
實驗中使用偶聯(lián)劑使酶與抗體結合，即通過應用單、雙或多功能試劑，分別與大分子的抗體所存在的功能性基團發(fā)生反應，生成酶—抗體偶聯(lián)復合物。不同的酶—抗體復合物制備方法中，最廣泛應用的戊二醛法，本法與其它偶聯(lián)方法相比，具有操作簡單、反應條件溫和，及實用面廣等長處。
酶標記抗體的質(zhì)量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。高質(zhì)量的抗體則可通過提取純化而獲得。在制備方法上，宜選用產(chǎn)率高、不影響結合物的活性和不混雜干擾性物質(zhì)且操作簡便易行的方法。

1) 辣根過氧化物酶(HRP)
辣根過氧化物酶（HRP）標記單抗和多克隆抗體的常用方法是過碘酸鈉法。其原理是HRP的糖基用過碘酸鈉氧化成醛基，加入抗體IgG后該醛基與 IgG氨基結合，形成Schiff氏堿。為了防止HRP中糖的醛基與其自身蛋白氨基發(fā)生偶合，在用過碘酸鈉氧化前先用二硝基氟苯阻斷氨基。氧化反應末了，用硼氫化鈉穩(wěn)定Schiff氏堿。

2) 堿性磷酸酶（AKP）
堿性磷酸酶（AKP）用于標記抗體，常用戊二醛一步法，將酶和單抗混合，再加入適量戊二醛，使酶和抗體蛋白的NH2分別與兩個醛基結合，制備成結合物。該法簡便，但所得產(chǎn)物不均一，抗體活性損失大，酶標記率低。

2.抗體的生物素化標記
親和素與生物素都可與蛋白質(zhì)(包括抗原、抗體、酶等)、熒光素等分子結合而不影響后者的生物活性，是理想的標記劑。一個抗體分子可偶聯(lián)數(shù)十個生物素或親和素分子，而親和素或生物素分子又可與酶或熒光素結合，從而組成一個生物放大系統(tǒng)，顯著提高檢測的靈敏度。常用的有親和素--生物素標記法(Labeled avidin biotin，LAB)、親和素-生物素橋法(bridged avidin biotin, BAB)和親和素-生物素-過氧化物酶復合物法(avidin biotin peroxid ase complex，ABC)。本實驗可使抗體或其它蛋白質(zhì)的ε-氨基通過手臂與酰化的生物素共價結合。其后，生物素化的分子可應用酶標-親和素或熒光染料-鏈霉親和素復合物來檢測。

3.抗體的熒光標記法
熒光抗體標記技術是將熒光素以化學方法與特異性抗體共價結合，形成熒光素-蛋白質(zhì)結合物（即熒光標記抗體），此結合物仍保留著抗體活性，同時具有熒光素的示蹤作用。當它與相應的抗原特異結合后，借助于熒光顯微鏡觀察呈現(xiàn)明亮的特異熒光。實驗中常用異硫qing基熒光黃（fluorescein isothiocyanate, FITC）作為標記物，在堿性溶液中，F(xiàn)ITC上的化學基團異硫qing基（-N=C=S）與抗體蛋白自由氨基（主要是賴氨酸的ε-氨基）結合，形成熒光抗體，以測定細胞相應抗原的存在。FITC具有很高的量子產(chǎn)量（發(fā)射光與吸收光的比值,0 .85），而且形成的偶聯(lián)物的穩(wěn)定性很好。FITC是應用最廣的熒光染料，流式細胞儀就按FITC的特性，設計了激光波長為488 nm,很接近于FITC的最大激發(fā)波長492nm）。

4.免疫膠體金標記抗體及檢測抗原
膠體金是一種常用的標記技術，是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術，有其獨特的優(yōu)點。近年已在各種生物學研究中廣泛使用。在臨床使用的免疫印跡技術幾乎都使用其標記。同時在流式、電鏡、免疫、分子生物學以至生物芯片中都可能利用到。
膠體金在光鏡和電鏡中均為有效的標記物，可以檢測單一和多重抗原。膠體金在電解質(zhì)中不穩(wěn)定，但被蛋白質(zhì)包被的膠體金是穩(wěn)定的。一般常用免疫球蛋白或蛋白A包被膠體金，可作標記二抗進行免疫檢測，本方法應用范圍廣，染色后的樣品可以長期保存。

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