免疫共沉淀(Co-IP)技術服務

   免疫共沉淀(co-immunoprecipitation，Co-IP)技術是檢測蛋白質間相互作用 的經典方法, 其基本原理是以細胞內源性靶蛋白為誘餌，將靶蛋白抗體與細胞總蛋白進行共孵育，促進免疫復合物的形成；隨后加入能夠與抗體Fc段結合的prorein A/G(預先結合固化在瓊脂糖小珠上)，形成“結合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗體-proteinA/G小珠”復合物，純化該復合物后凝膠電泳分離蛋白，應用 Western blot 或者質譜技術鑒定靶蛋白的結合蛋白。

與其它研究方法相比，免疫共沉淀最大的優勢在于該體系是在生理條件下檢測蛋白質之間的相互作用，因此，不僅可以檢測到體內形成的天然復合體，而 且可排除過表達靶蛋白所帶來的假陽性。其次內源性的靶蛋白質是完全加工、修飾和成熟的蛋白質，因此，依賴于修飾的蛋白質相互作用也能被檢測到。



 一 原理：

IP是利用抗原蛋白質和抗體的特異性結合以及細菌蛋白質的“prorein A"特異性地結合到免疫球蛋白的FC片段的現象活用開發出來的方法。目前多用精制的prorein A預先結合固化在argarose的beads上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應后，beads上的prorein A就能吸附抗原達到精制的目的。

實驗最需要注意點就是抗體的性質。抗體不同和抗原結合能力也不同，免染能結合未必能用在IP反應。建議仔細檢查抗體的說明書。特別是多抗的特異性是問題。

其次，要注意溶解抗原的緩沖液的性質。多數的抗原是細胞構成的蛋白，特別是骨架蛋白，緩沖液必須要使其溶解。為此，必須使用含有強界面活性劑的緩沖液，盡管它有可能影響一部分抗原抗體的結合。另一面，如用弱界面活性劑溶解細胞，就不能充分溶解細胞蛋白。即便溶解也產生與其它的蛋白結合的結果，抗原決定族被封閉，影響與抗體的結合，即使IP成功，也是很多蛋白與抗體共沉的悲慘結果。

再次，為防止蛋白的分解，修飾，溶解抗原的緩沖液必須加蛋白每抑制劑，低溫下進行實驗。

每次實驗之前，首先考慮抗體/緩沖液的比例。抗體過少就不能檢出抗原，過多則就不能沉降在beads上，殘存在上清。緩沖劑太少則不能溶解抗原，過多則抗原被稀釋。欲速則不達，確定好比例很必要。