ATPase染色液(鈣鈷法)實驗步驟
2020-05-29 14:05 作者：洛辰 來源：上海遠慕生物試劑
產品名稱：ATPase染色液(鈣鈷法)
供應商：遠慕生物
規格：5×50ml
保存：4℃,避光,6個月
三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphatase，ATPase)是一種水解酶，是催化ATP合成的一種酶。三磷酸腺苷酶根據所用激活劑、抑制劑以及酶定位的不同分為膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、線粒體三磷酸腺苷酶等。ATPase能水解三磷酸腺苷為磷酸腺苷和磷酸，此酶只作用于磷酸與磷酸之間的高能鍵，因而釋放大量能量。其催化反應如下：A-P-P-P + H2O→A-P-P + H3PO4 +能量
ATPase染色(鈣鈷法)原理在于三磷酸腺苷酶水解三磷酸腺苷為二磷腺苷和磷酸，磷酸根與鈣離子結合為磷酸鈣沉淀，再依次被置換為磷酸鈷和硫化鈷，最終產物為黑色硫化鈷沉淀。
產品組成：
名稱：Storage
規格：5×50ml
試劑(A): 鈣鹽溶液 50ml RT 避光
試劑(B): ATPase孵育液 50ml 4℃ 避光
試劑(C): 硝酸鈷溶液 50ml RT
試劑(D): 中性福爾馬林 50ml RT
試劑(E): ALP硫化溶液 2×1ml RT 避光
試劑(F): ATPase對照液 10ml 4℃ 避光
使用說明書 1份
自備材料:
1、 蒸餾水
2、 恒溫箱
操作步驟(僅供參考)：
(一)石蠟切片染色
1、 石蠟切片脫蠟后，入蒸餾水。
2、 入鈣鹽溶液中，37℃溫箱5min。
3、 入ATPase孵育液，孵育2～4h。
4、 蒸餾水洗1min。
5、 入硝酸鈷溶液5min，入蒸餾水。
6、 入中性福爾馬林，室溫固定2min。
7、 流水沖洗2min。
8、 在上述過程中配制ALP硫化工作液，即取試劑(E)用蒸餾水稀釋50倍, 即為ALP硫化
工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育2min。
9、 流水洗10min后，入蒸餾水。
10、 石蠟切片經95%乙醇溶液及無水乙醇脫水。
11、 二甲苯透明，樹膠封片。
(二)冰凍切片染色
1、 冰凍切片直接入蒸餾水。
2、 入鈣鹽溶液中，37℃溫箱5min。
3、 入ATPase孵育液，孵育40min。
4、 蒸餾水洗1min。
5、 入硝酸鈷溶液5min，入蒸餾水。
6、 入中性福爾馬林，室溫固定2min。
7、 流水沖洗2min。
8、 在上述過程中配制ALP硫化工作液，即取試劑(E)用蒸餾水稀釋50倍, 即為ALP硫化
工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育2min。
9、 流水洗10min后，入蒸餾水。
10、 甘油明膠封固。
染色結果：
酶所在陽性部位黑色硫化鈷沉淀
陰性對照(可選)：
1、取對照切片，用試劑(F)-ATPase對照液進行孵育，并與用ATPase孵育液孵育的切片進
行比較。兩者反應相同部位可能有非特異性磷酸(單酯)酶存在，兩者不同部位才是ATP酶活
性所在。
2、將切片入80℃蒸餾水10min，再與其他組織切片同時孵育，結果應為陰性。
注意事項：
1、 ALP孵育液、ALP硫化液易失效，最好分成小分儲存，一經開啟立即使用。
2、 ALP硫化液具有腐蝕性和刺激性氣味，應小心操作。
3、 對冰凍切片染色時，應減少切片在室溫暴露的時間。
4、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
![雙[三(羥甲基)氨基甲烷],CAS:6976-37-0](http://struc.chem960.com/strucimg/7000/ctzw0nzi34oyob9fnlmhiwee.png)
