做轉染實驗時小編就抱著一個信念，就是要給細胞點“顏色”看（熒光），但你知道嗎？就這個簡單的實驗過程，小小的細胞卻有著大大的能量，實驗過程中帶陽離子的脂質體充當著“搬運工”的角色將質粒從胞外“抓”到胞內，而細胞為質粒的復制、轉錄、翻譯提供“場所和原材料”，自己也跟著“增光填色”,但“上色”過程中會遇到一些問題，總結下來主要有以下二個方面：

    細胞狀態差

    轉染效率低

1. 

    Q1：轉染后細胞狀態較差

    A：分析：主要是鋪板和反應液配制的原因

     細胞狀態是整個實驗的關鍵，如果細胞狀態不好，則轉染后細胞狀態當然就好不了

     鋪板：過多或不均勻，細胞長的太滿就會狀態較差

     脂質體本身有毒性，如果脂質體加入量太多，會導致細胞狀態較差，或者細胞死亡，建議在做正式實驗前，先做一下預實驗，摸索一下質粒和脂質體的配比。

    Q2：轉染后熒光效率低

    A：分析：主要是細胞原因和“搬運”過程中的問題

     1、細胞狀態仍然是重中之重，如果有一段時間轉染效果很不理想，必須要換一批次細胞；

     2、加入目的質粒后輕輕混勻，太用力會破壞混合液的結構，

     3、質粒與轉染試劑的比值： 過高一部分質粒不能進入細胞，過低“搬運工”太多，有毒性且浪費；

     4、吸、打液體時注意槍頭內液面高度，是否完全打出；

     5、反應液配好后等待20min，質粒才會被完全包裹；

     6、反應液滴加加入細胞，使“脂質體+質粒”均勻分布；

     7、質粒反復凍融影響濃度，盡量減少凍融次數；脂質體 -20℃保存，用完應馬上放回；

     8、必要時需要檢測一下質粒的濃度是否準確；