養(yǎng)好細(xì)胞的前提,如何選擇好的血清?
2020-08-25 10:00 作者:洛辰 來源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)而言,血清的重要性顯而易見。它含有包括生長(zhǎng)因子在內(nèi)的蛋白、氨基酸、脂類、碳水化合物、維生素及其他成份,可以促進(jìn)貼壁或懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)和維持。
胎牛血清(FBS)是細(xì)胞培養(yǎng)最常用的血清。
隨著全球生物學(xué)研究的迅猛發(fā)展,對(duì)血清的需求也越來越多,加上進(jìn)口運(yùn)輸成本增加等等各種原因,進(jìn)口血清的價(jià)格在國(guó)內(nèi)也是悄悄地蹭蹭地,站到了「不菲」的價(jià)位。
由于進(jìn)口血清價(jià)格昂貴,購(gòu)買渠道不明朗,市場(chǎng)上以次充好,假冒問題等日益放大,所以研究人員所關(guān)注的因素有以下幾點(diǎn):
1、 血清供應(yīng)連續(xù)性
2、 血清批次一致性
3、 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性
4、 價(jià)格是否有波動(dòng)
5、 產(chǎn)品的完整性
注意:
在水浴過程中,血清的平面要完全浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動(dòng),使血清混勻,但不要產(chǎn)生泡沫!
與 4 ℃ 過夜法相比,三步法為什么對(duì)血清更好呢?重點(diǎn)有二!
其一:關(guān)系到沉淀出現(xiàn)的幾率!
記得嗎?血清在融化過程中,瓶子里冰塊的底部你會(huì)看見亮亮的蛋白絲在下沉,如同蜂蜜溶于水時(shí)的亮線,這就是血清中大量的蛋白在快速融化,而水的熔點(diǎn)高于蛋白,融化的速度是比蛋白慢的。(回想一下高級(jí)冰淇淋和大棒冰的區(qū)別,你懂得!)試想,如果采用 4 ℃ 過夜的方法,1 瓶 500 毫升的血清融化好,大約需要 10 小時(shí)左右,蛋白先融化,沉降在瓶子的底部,水融化的速度比蛋白慢,于是造成大量蛋白溶于少量的水,此時(shí)就很容易有一些蛋白飽和析出,(大多是脂蛋白和纖連蛋白),這就是血清融化中產(chǎn)生沉淀的重要原因之一。
采用三步法,只要 2.5 個(gè)小時(shí),溫和有效地加快了水融化的速度,另一方面,融化過程中可以間斷輕輕搖擺瓶子,讓蛋白在瓶中混勻。此方法不但節(jié)約了時(shí)間,而且最大限度減少了血清沉淀出現(xiàn)的幾率。
血清融化過程中,蛋白質(zhì)會(huì)比水先融化。冰塊底部亮亮的細(xì)絲就是融化中的蛋白。
其二:血清在培養(yǎng)細(xì)胞中,最重要的是利用它的活性的因子,因此,融化過程中最大限度地保留因子的活性,就變得非常重要。回憶一下,細(xì)胞復(fù)蘇時(shí),要保持細(xì)胞的活性,我們是要遵循「快融」原則還是「慢融」原則呢?快融!血清同樣如此!三步法需要兩個(gè)半小時(shí),4 ℃ 過夜需要大約 10 個(gè)小時(shí)(冰箱一般設(shè) 2-8 ℃,所以各實(shí)驗(yàn)室融化時(shí)間會(huì)稍有出入)。哪個(gè)速度對(duì)保留活性更好?不言而喻!
養(yǎng)細(xì)胞不易,選對(duì)好血清,更是養(yǎng)好細(xì)胞的頭等大事,希望以上信息對(duì)你有所幫助。