石蠟切片與冰凍切片在組織學(xué)中，蕞常用到的有石蠟切片與冰凍切片。兩者各有優(yōu)缺點(diǎn)，在實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用上也有所不同，比如石蠟切片常用于進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)，冰凍切片常用于免疫熒光實(shí)驗(yàn)。而兩個(gè)實(shí)驗(yàn)都是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)，對(duì)其進(jìn)行定位、定性及相對(duì)定量的研究。下面遠(yuǎn)慕生物為大家詳細(xì)介紹下兩種方法的異同點(diǎn)。
 

一．石蠟切片

石蠟切片組織學(xué)常規(guī)制片技術(shù)中蕞為廣泛應(yīng)用的方法。常用于觀察正常細(xì)胞組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)。一般的組織從取材固定到封片制成玻片標(biāo)本需要數(shù)日，但標(biāo)本可以長(zhǎng)期保存使用，是一種永久性顯微玻片標(biāo)本。

1、固定：將新鮮組織切成小塊，固定于4%多聚甲醛過(guò)夜。

原理：固定時(shí)間則根據(jù)材料塊的大小及松密程度而定。固定可以凝固組織中的物質(zhì)成分、終止細(xì)胞的一切代謝過(guò)程、防止細(xì)胞自溶或組織變化，盡可能保持其活體時(shí)的結(jié)構(gòu)。同時(shí)能使組織硬化，有利于切片的進(jìn)行。

2、脫水：為了減少組織材料的急劇收縮，應(yīng)使用從低濃度到高濃度遞增的順序進(jìn)行經(jīng)70%、85%、95%直至純酒精（無(wú)水乙醇），每次時(shí)間為1小時(shí)。

原理：固定后的組織材料需除去留在組織內(nèi)的固定液及其結(jié)晶沉淀，否則會(huì)影響后期的染色效果。原因在于透明劑多數(shù)是苯類，苯類和石蠟均不能與水相融合，水分不能脫盡，苯類無(wú)法浸入。酒精為常用脫水劑，它既能與水相混合，又能與透明劑相混。

3、透明：常用的透明劑有二甲苯，二甲苯是石蠟的溶劑。此步蕞好在通風(fēng)廚進(jìn)行。

原理：純酒精不能與石蠟相溶，還需用能與酒精和石蠟相溶的溶劑，替換出組織內(nèi)的酒精。材料塊在透明劑浸漬過(guò)程稱透明。

4、浸蠟：先把組織材料塊放在熔化的石蠟和二甲苯的等量混合液浸漬1小時(shí)。先后移入2個(gè)熔化的石蠟液中浸漬1小時(shí)左右。

原理：使石蠟浸入組織而起支持作用。

5、包埋：以少許熱蠟液將其底部迅速貼附于包埋盒內(nèi)上，然后置于速凍臺(tái)，讓石蠟固定。

6、切片：切片刀的銳利與否、蠟塊硬度是否適當(dāng)都直接影響切片質(zhì)量，可將蠟塊至于冷水中改變蠟塊硬度。通常切片厚度為5微米，用毛筆輕托輕放在37度水浴中展片。

7、貼片與烤片：將水浴中展片撈至玻片上鋪正，然后將載玻片放入37℃溫箱中干燥。

8、切片脫蠟及水化：干燥后的切片置于二甲苯中進(jìn)行脫蠟，然后依次使用從高濃度到低濃度遞減的順序進(jìn)行經(jīng)純酒精、95%、85%、70%進(jìn)行水化。

原理：切片需脫蠟及水化才能在水溶性染液中進(jìn)行染色。用二甲苯脫蠟，再逐級(jí)經(jīng)純酒精及梯度酒精直至蒸餾水。

9、染色：染色的目的是使細(xì)胞組織內(nèi)的不同結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)不同的顏色以便于觀察。

經(jīng)典的蘇木精和伊紅：細(xì)胞核被蘇木精染成紫藍(lán)色，多數(shù)細(xì)胞質(zhì)及非細(xì)胞成分被伊紅染成粉紅色。實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單。

免疫組化：指帶顯色劑標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞原位通過(guò)抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)。

二.冰凍切片

冰凍切片， 優(yōu)點(diǎn)是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性，做免疫組化時(shí)不需抗原修復(fù)這一步。 缺點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，可能會(huì)使抗原彌散。因其制作過(guò)程較石蠟切片快捷、簡(jiǎn)便，而 多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷。

冰凍切片相比較于石蠟切片簡(jiǎn)單易行，一般進(jìn)行固定脫水后，固定于包埋劑就可以在冰凍切片機(jī)進(jìn)行切片。有些新鮮標(biāo)本可以直接取材后，冷凍托涂包埋劑后置于冷凍托上速凍，凍好后立即切片。

冰凍切片蕞重要的是防止樣品中冰晶的出現(xiàn)，一般可以通過(guò)速凍的方法使組織溫度驟降，減少樣品內(nèi)冰晶的形成。也可以將組織置于20％～30％蔗糖溶液l～3天，利用高滲吸收組織中水分，減少組織含水量。