一、母液的配制和保存

在植物組織培養(yǎng)工作中，配制培養(yǎng)基是日常必備的工作。為簡(jiǎn)便起見，通常先配制一系列母液(stockso1utlon)，即貯備液。所謂母液是欲配制液的濃縮液，這樣不但刊以侏讓各物質(zhì)成分的準(zhǔn)確性及配制時(shí)的快速移取，而且還便于低溫保藏。一般母液配成比所需濃度高10～100倍。母液配制時(shí)可分別配成大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物和激素類等。配制時(shí)注意一些離子之間易發(fā)生沉淀，如Ca2+和S042-、Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，會(huì)產(chǎn)生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。配制母液時(shí)要用蒸餾水或重蒸餾水。藥品應(yīng)選職等級(jí)較高的化學(xué)純或分析純。藥品的稱量及定容都要準(zhǔn)確。各種藥品先以少量水讓其充分溶解，然后依次混合。一般配成大量元素、微量元素、鐵鹽、維生索等母液，其中維生素、氨基酸類可以分別配制，也可以混在一起。母液配好后放入冰箱內(nèi)低溫保存，用時(shí)再按比例稀釋。

下面以MS培養(yǎng)基制備為例，概述其制備方法，為MS基本培養(yǎng)基4種母液成分配制。

(1)大量元素母液可配成濃度10倍母液。用分析天平按表25稱取藥品，分別加100mL左右蒸餾水溶解后，再用磁力攪拌器攪拌，促進(jìn)溶解。注意Ca2+和PO3-4易發(fā)生沉淀。然后倒入1000mL定容瓶中，再加水定容至刻度，成為10倍母液。

(2)微量元素母液可配成100倍的母液。用分析天平按表準(zhǔn)確稱取藥品后，分別溶解，混合后加水定容至1000mL。

(3)鐵鹽母液可配成100倍的母液，按表稱取藥品，可加熱溶解，混合后加水定容至1000mL。

(4)有機(jī)物母液可配成l00倍的母液。按表分別稱取藥品，溶解，混合后加水定容至1000mL。

(5)激素母液每種激素必須單獨(dú)配成母液，濃度一般配成1mg／mL。用時(shí)根據(jù)需要取用。因?yàn)榧に赜昧枯^少，一次可配成50mL或100mL。另外，多數(shù)激素難溶于水，要先溶于可溶物質(zhì)，然后才能加水定容。

激素的配法如下：將IAA、IBA、GA等先溶于少量的95％的酒精中，再加水定容至一定濃度。NAA可先溶于熱水或少量95%的酒精中，再加水定容到一定濃度。2，4一D可用少量1mo1／L NaOH溶解后，再加水定容到一定濃度。將KT和BA先溶于少量1mol／L的HCl中再加水定容。將玉米素先溶于少量95％的酒精中，再加熱水定容到一定濃度。配制好的母液瓶上應(yīng)分別貼上標(biāo)簽，注明母液名稱、配制倍數(shù)、日期及配lL培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)取的量。

二、培養(yǎng)基的配制及其滅菌

1．培養(yǎng)基的配制

用量簡(jiǎn)移取大量元素母液l00mL，用專一對(duì)應(yīng)的移液管分別吸取微量元素母液10mL、鐵鹽母液10mL、有機(jī)物母液10mL，均置入1000mL定容瓶中，若不加任何激素，則為MS配養(yǎng)基；若需加激素按配方移取激素母液即可。

將已裝母液的定容瓶用蒸餾水或自來水定容到1000mL，取1／3左右倒入小鋁鍋中加熱。同時(shí)，稱好30g蔗糖，稱瓊脂絲7g(或瓊脂粉)，也傾入小鋁鍋中，邊加熱邊攪拌，防止糊底。旺火煮開，再用文火加熱，直至瓊脂全鄙融化即清澈見底為度(若用瓊脂粉，應(yīng)加入100mL，左右的液體培養(yǎng)基，并攪拌均勻)。然后再傾入定容瓶?jī)?nèi)余下的液體培養(yǎng)基，搖晃均勻即可。

培養(yǎng)基配好后，要調(diào)整pH值。用0．1mol／L的NaOH或HCI液調(diào)成pH值5．8左右。在培養(yǎng)基配方不大變動(dòng)的情況下可用經(jīng)驗(yàn)法。可以將連續(xù)3次測(cè)定所加入的酸或堿液的平均值作為以后調(diào)整的用量值。調(diào)后注意一定要搖動(dòng)均勻，還要注意酸或堿液不要放置時(shí)間太久。

2．培養(yǎng)基的分裝與滅菌

培養(yǎng)基配好后要趁熱分裝，l00mL的容器約裝入30～40mL培養(yǎng)基，即1L培養(yǎng)基約裝35瓶左右。太多則浪費(fèi)培養(yǎng)基，太少不易接種和影響生長(zhǎng)。但要根據(jù)培養(yǎng)對(duì)象來決定。如果培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)，應(yīng)適當(dāng)多裝培養(yǎng)基；生根等短期培養(yǎng)時(shí)，可適當(dāng)少加培養(yǎng)基。分裝時(shí)不要把培養(yǎng)基弄到管壁上，以免日后污染。裝后用封口材料包上瓶口，扎口后，寫上培養(yǎng)基種類，準(zhǔn)備滅菌。注意不能放置時(shí)間過長(zhǎng)，以免產(chǎn)生污染。

分裝好的培養(yǎng)基置于高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌，滅菌條件為溫度121℃，壓力0.1lMPa。

具體操作方法為：打開鍋蓋，加水至水位線。把已裝好培養(yǎng)基的三角瓶，連同蒸餾水及接種用具等放入鍋筒內(nèi)，裝時(shí)不要過分傾斜培養(yǎng)基，以免弄到瓶口上或流出。然后蓋上鍋蓋，對(duì)角旋緊螺絲，接通電源加熱，當(dāng)升至0．05MPa時(shí)，打開放氣閥放氣，氣壓指針回“0”，后關(guān)閉放氣閥。當(dāng)氣壓上升到0．1lMPa時(shí)，保壓滅菌20～35min，到時(shí)停止加熱。當(dāng)氣壓回“0”后打開鍋蓋，取出培養(yǎng)基，放于平臺(tái)上冷凝。滅好菌的培養(yǎng)基不要放置時(shí)間太長(zhǎng)，最多不能超過1周。