外植體滅菌是植物細胞組織培養重要的工作之一。接種用的材料表面，常常附有多種多樣的微生物，這些微生物一旦帶進培養基，就會迅速滋生，使實驗前功盡棄。因此，材料在接種前必須進行滅菌。滅菌時，既要將材料上附著的微生物殺死，同時又不能傷及材料。因此，滅菌采用何種藥劑，什么濃度，處理多長時間，均應根據材料對藥劑的敏感情況來確定。

與滅菌相關的一個概念是消毒，它指殺死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再發生危害作用，顯然經過消毒，許多細菌芽孢、霉菌的厚垣孢子等不會完全殺死，即由于在消毒后的環境里和物品上還有活著的微生物，所以通過嚴格滅菌的操作空間(接種室、超凈臺等)和使用的器皿，以及操作者的衣著和手都不帶任何活著的微生物。在這樣的條件下進行的操作，就叫作無菌操作。一般來說，外植體接種的過程都是在無菌的環境里進行的，因此，外植體接種前都必須徹底滅菌。

用于植物外植體滅菌的滅菌劑有升汞、甲醛、過氧化氫、高錳酸鉀、來蘇兒、漂白粉、次氯酸鈉、抗生素、酒精等。使用這些滅菌劑，都能起到表面殺菌的作用。現將主要滅菌劑常用濃度和滅菌效果列出，其中70％～75％的酒精有較強的殺菌力、穿透力和濕潤作用，可排出材料上的空氣，利于其他消毒劑的滲入，常與其他消毒劑配合使用。酒精穿透力強，易損傷材料，所以一般處理時間要短。

上述滅菌劑應在使用前臨時配制，氯化汞可短期內貯用。次氯酸鈉和次氯酸鈣都是利用分解產生氯氣來殺菌的，故滅菌時用廣口瓶加蓋較好；升汞是用重金屬汞離子來滅菌的；過氧化氫是分解釋放原子態氧來殺菌的，這種藥劑殘留的影響較小，滅菌后用無菌水漂洗3～4次即可；由于用升汞液滅菌的材料，難以對升汞殘毒有效去除，所以應當用無菌水漂洗8～10次，每次不少于3min，以盡量去除殘毒。

滅菌時，把瀝干的植物材料轉放到燒杯或其他器皿中，記好時間，倒入滅菌溶液，不時用玻璃棒輕輕攪動，以促進材料各部分與消毒溶液充分接觸，驅除氣泡，使滅菌徹底。在快到時間之前1～2min，開始把滅菌液傾入一備好的大燒杯內，要注意勿使材料倒出，傾凈后立即倒入無菌水，輕攪漂洗。滅菌時間是從倒入消毒液開始，至倒入無菌水時為止。記錄時間還便于比較滅菌效果，以便改正。滅菌液要充分浸沒材料，寧可多用些滅菌液，切勿勉強在一個體積偏小的容器中使用很多材料滅菌。

在滅菌溶液中加吐溫80效果較好，這些表面活性劑主要作用是使藥劑更易于展布，更容易浸入到滅兩的材料表面。但吐溫加入后對材料的傷害也在增加，應注意吐溫的用量和滅菌時間，一般加入滅菌液的0．5％，即在100mL加入15滴。

最后一步是用無菌水漂洗，漂洗要每次3min左右，視采用的消毒液種類，漂洗3～l0次。無菌水漂洗作用是免除消毒劑殺傷植物細胞的副作用。
 

外植體的滅菌工作應在接種室或接種箱內無菌的條件下進行，各種不同類型的材料滅菌方法如下，

(1)花藥的滅菌用于組織培養的花藥，按小孢子發育時期要求，實際上大多沒有成熟，花藥外而有萼片、花瓣或穎片、稃片保護著，通常處于無菌狀態。所以一般只對整個花蕾或幼穗進行體表滅菌即可。如茄(solanumrnelongennaL)的花藥，滅菌時先去掉花蕾的萼片，用70％酒精擦洗花瓣，然后將整個花蕾浸泡在飽和漂白粉上清液中10min，再經無菌水清洗2～3次，即可接種。這一滅菌程序，也適用于其他植物花藥的滅菌。

(2)果實和種子的滅菌根據果實和種子清潔程度，用自來水沖洗10～20min甚至更長時間，然后進行消毒。

莢果的滅菌；綠色莢果可以采用火焰殺菌法。將綠色莢果稍加洗滌，轉入95％酒精中，然后取出莢果放入滅菌的培養皿中，點燃灼燒，并不斷翻轉莢果，待表面酒精燃盡，即可獲得無菌莢果。再在無菌條件下取出幼胚或種子用于接種。火焰滅菌具有簡便、快速、經濟、徹底之優點。該程序也適用于塊根類外植體的滅菌。

種子滅菌：通常首先用熱水浸種，然后再用次氯酸鈉或氧化汞等殺菌劑滅菌。熱水浸種除具有增加種皮透性、打破種子的休眠、促進種子萌發的作用外，高水溫也有一定的殺菌作用。浸種的水溫和時間與種子的大小、干燥程度以及種皮厚度有關。

具體步驟是用自來水沖洗10～20min，再用75％酒精消毒1～2min，再用2％次氯酸鈉溶液浸泡5min，后用無菌水沖洗3～5次，就可以去除種子的病菌，進行組織培養。

果內種子則先要用10％次氯酸鈣浸泡20～30min，甚至幾小時，依種皮硬度而定。對難以消毒的還可以用0．1%升汞或1％～2%溴水消毒5min。對用胚或胚乳培養的種子，如種皮太硬的種子，也可預先去掉種皮，再用4％～8％的次氯酸鈉溶液浸泡8～l0min，經過無菌水沖洗后。在無菌條件下取出外植體即可用于接種，這類外植體一般都不帶污染微生物。

(3)莖尖、莖段及葉片的滅菌滅菌方法與花藥的滅菌方法相同。對于莖葉，因為暴露在空中，且生有毛或刺等附屬物，所以滅菌前應該用自來水沖洗干凈，用吸水紙將水吸干，再用70％酒精漂洗一下。然后，根據材料的老、嫩和枝條的堅硬程度，用2％～10％次氯酸鈉溶液浸泡6～15min，用無菌水沖洗3次，用無菌紙吸干后進行接種。

(4)根和貯藏器官的滅菌這類材料大多埋于土中，材料上常有損傷及帶有泥土。滅菌比較困難。滅菌前，要用自來水清洗，并用毛刷或毛筆輕輕刷洗掉污物，必要時用刀片切去損傷和污染嚴重部分，吸于多余水分后用70％酒精漂洗一下，再用0．1％～0．2％的氯化汞滅菌5～10min，或用6％～8％次氯酸鈉溶液浸5～15min，接著用無菌水清洗及用無菌紙吸干，然后進行接種。