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甲基綠-派絡寧染色液使用步驟

2021-10-27 14:16 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
產品名稱:甲基綠-派絡寧染色液
規格:50ml/100ml
分類:核酸染色
儲存條件:室溫,避光,6個月
用途:脫氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)染色
注意事項:甲基綠經過提純,染色結果為:DNA呈綠色,RNA呈紅色

產品簡介:
甲基綠-派洛寧染色液(Methyl Green-Pyronin Stain,MGP)甲基綠-派洛寧染色液是一種把細胞核染成綠色或藍綠色,把細胞漿和細胞核中的核仁染成紅色或紅紫色的染色液。甲基綠又稱雙綠SF,屬于堿性染料,是具有金屬光澤的綠色微結晶或粉末,分子量為608.78,分子式為C27H35Cl4N3Zn。甲基綠和細胞核中的DNA結合,從而使細胞核染成綠色或藍綠色,派洛寧可以和細胞漿或核仁中的RNA結合,從而使細胞漿和核仁染成紅色或紅紫色。

甲基綠-派洛寧染色液經過改良,不含甲醇,在組織或細胞染色中對細胞核進行染色,其中的甲基綠經過提純,更容易著色。本染色液也可以和免疫熒光染色或免疫組化染色配合使用。10ml染色液可以染色20個樣本。

自備材料:
1、系列乙醇、蒸餾水
2、濾紙、RNase(可選)
3、丁三醇或丙酮或正戊醇
4、4%多聚甲醛

操作步驟(僅供參考):
(一)石蠟切片染色
1、組織入Carnoy固定液或10%中性福爾馬林,固定3~5h。
2、切片5μm,常規脫蠟至水,蒸餾水稍洗。
3、入Methyl Green-Pyronin Stain,室溫浸染30~60min。
4、取出切片,用濾紙稍微吸干切片周圍染色液。
5、用丁三醇(也可用丙酮或正戊醇)沖洗3次,每次2~3min。
6、二甲苯透明,中性樹膠封固。

(二)冰凍切片染色
1、蒸餾水沖洗2min。
2、切片入Methyl Green-Pyronin Stain,室溫浸染25~50min。
3、用蒸餾水沖洗2次,此時樣本呈藍色。
4、余下步驟同石蠟切片染色。

(三)細胞染色
1、用4%多聚甲醛固定10min以上。
2、蒸餾水洗滌2min。
3、換用新鮮的蒸餾水,再洗滌2min。
4、用Methyl Green-Pyronin Stain染色5~10min。
5、顯微鏡下觀察。

(四) 熒光染色
1、如果進行免疫熒光染色,在染色后應70%乙醇洗滌2次,每次2min。
2、95%乙醇脫水2min。
3、PBS或生理鹽水或TBS等用于免疫染色或熒光染料染色的溶液浸泡5min。
4、進行免疫熒光染色或其它熒光染料的染色。

染色結果:
細胞核(DNA)  綠色或藍綠色
細胞漿和核仁(RNA)  紅色或紅紫色

陰性對照:
1、取另外一張連續切片入RNase(1mg/ml),37℃恒溫箱內孵育3h,蒸餾水沖洗干凈。
2、入Methyl Green-Pyronin Stain染色,余下步驟同上。RNA染色結果為陰性。

注意事項:
1、使用染色液時建議先取1~2個樣品做預實驗。
2、Methyl Green-Pyronin Stain染色可以根據染色結果和要求調整時間。
3、有些粘液細胞有可能被派洛寧染成紅色,應注意區分。
有效期:12個月有效。
 
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