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遠慕詳解:重組蛋白究竟是什么?

2021-11-10 9:57 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
重組蛋白的產生是應用了重組DNA或重組RNA的技術從而獲得的蛋白質。體外重組蛋白的生產主要包括四大系統:原核蛋白表達,哺乳動物細胞蛋白表達,酵母蛋白表達及昆蟲細胞蛋白表達。

重組蛋白獲得途徑:
重組蛋白需要使用表達系統來對其進行制備,其獲得途徑可以分為體外方法和體內方法。兩種方法的前提都是應用基因重組技術,獲得連接有可以翻譯成目的蛋白的基因片段的重組載體,之后將其轉入可以表達目的蛋白的宿主細胞從而表達特定的重組蛋白分子。

體外重組蛋白的生產主要包括四大系統:原核蛋白表達(最常用的大腸桿菌蛋白表達),哺乳動物細胞蛋白表達(常用的細胞CHO,HEK293),真核表達系統(酵母)及昆蟲細胞蛋白表達。合適表達系統的選擇取決于重組蛋白的特性、重組蛋白的預期應用以及該系統能否生產足夠量的蛋白質,根據自身的下游運用選擇合適的蛋白表達系統,提高表達成功率。

重組蛋白表達系統:

(1)目前應用最廣泛的表達系統有三大類,大腸桿菌(Esherichia coli)表達系統、酵母表達系統、CHO細胞表達系統。其中,大腸桿菌是表達重組蛋白最常用的宿主菌,已應用于許多具有重要藥用價值蛋白的生產。

大腸桿菌表達系統具有許多優點,如生長快、培養成本低廉、遺傳背景清楚和易實現高密度培養等。大腸桿菌DH5α是一種誘變菌株,主要表現對外源DNA的免疫缺乏。大腸桿菌DH5α是基因工程常用的宿主菌之一,相比于正常菌種缺少了一定的免疫機制。

(2)不同的表達系統和培養方法顯著影響下游的處理過程,目標蛋白表達是否形成包涵體,目標蛋白表達的定位(胞內、細胞膜內、周質空間和胞外),蛋白表達的量都依賴于所選擇的的表達系統。

重組蛋白表達系統

重組蛋白種類:
目前比較熱門的重組蛋白主要為細胞因子類,而細胞因子主要包括如下:
按功能分,可分為以下幾種:
1、白細胞介素(Interleukin,IL)
由多種細胞產生并作用于多種細胞的一類細胞因子。由于最初是由白細胞產生且又在白細胞間發揮作用,所以得名,現仍沿用此名。

2、干擾素(interferon,IFN)
具有干擾病毒復制的能力,故得名。其具有十分廣泛的生物活性,在免疫應答和免疫調節中發揮重要作用,也是主要的促炎細胞因子之一。干擾素分為:I型(7種,如IFN-α和IFN-β)和II型(僅有IFN-Y)。

3、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)
由于在體內外均可直接殺傷腫瘤細胞而得名。其家族成員約有30個。

主要成員:
(1)TNF-α,一種單核因子主要由單核細胞和巨噬細胞產生;
(2)TNF-β,一種淋巴因子,主要由淋巴細胞、NK細胞等產生,其生物學活性與TNF-α相類似。

4、集落刺激因子(colony stimulating factor,CSF)
一組在體內外均可選擇性刺激造血祖細胞增殖、分化并形成某一譜系細胞集落的細胞因子,包括巨噬細胞CSF、粒細胞CSF、巨噬細胞/粒細胞CSF、干細胞因子等。

5、生長因子(growth factor,GF)
一類可介導不同類型細胞生長和分化的細胞因子,根據其功能和所作用細胞的不同,分別命名為轉化生長因子(TGF)、神經生長因子(NGF)、表皮生長因子(EGF)、血管內皮細胞生長因子(VEGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)等。

6、趨化性細胞因子(chemokine)
一類對不同靶細胞具有趨化效應的細胞因子家族,可由白細胞和某些組織細胞分泌,是一個包括60多個成員的蛋白質家族。大部分成員含4個保守的半胱氨酸(cysteine,C)根據其N端半胱氨酸的排列方式,可分為CXC、CC、C、CX3C四個亞族。
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