蛋白質是非常敏感的,即使已經提取濃縮,在儲存時仍然會發生降解、聚合和失活。如下分析幾種保存方法的優缺點和一些小技巧,在儲存時應根據自己的蛋白和實驗需求選擇適合自己的方法,權衡利弊,以免造成實驗的麻煩。下面跟隨遠慕生物一起了解下吧!
1.儲存在4°C溶液
將濃縮蛋白質儲存在單一溶液(如PBS),置于聚丙烯管或干凈的玻璃容器中,放在4°C冰箱保存。
優點:蛋白容易獲得,可以快速進行實驗,且同一管樣品可重復取樣,這樣避免了因經常解凍而加速蛋白的降解。
缺點:在重復取樣時,溫度升高且暴露于環境中,可能會導致微生物污染,蛋白質失活和氧化。要避免這種情況,可以把蛋白質分成小份儲存,并加入蛋白酶抑制劑、抗菌劑和還原劑等。但也要根據自己蛋白的情況,如果你的蛋白是完整的膜蛋白或分泌蛋白,很可能分子內存在二硫鍵,為保證其完整性,應該存儲在氧化環境中。另外,儲存時間超過一個月的蛋白可以考慮扔掉。
2.儲存在-20°C,加入冷凍保護劑
可以將蛋白保存在含有25-50% (w/v) 甘油或乙二醇溶液中。
優點:在低溫下,蛋白質對微生物污染,蛋白酶降解和氧化反應更有抵抗力,容易保證其活性。用甘油或乙二醇稀釋使蛋白處于溶液中,可以方便取樣。此外,這種方式儲存的蛋白質可以保存長達一年,對于抗體軛合物是一個好的選擇。
缺點: 蛋白質在-20°溶液中仍有可能遭受水解、污染和氧化,也需加入抑制劑、還原劑等。而且將樣品存放在50%冷凍保護劑中有時是不可取的,取決于你接下來要做的實驗。
3.凍存在-80°C或液氮中
將蛋白質分裝成一次使用的量,快速冷凍。
優點:可以長期保存(多年),不需要甘油、疊氮化鈉等化學物質,避免蛋白質降解或微生物污染。
缺點:冷凍蛋白質應一次性使用,為了避免反復凍融發生降解。此外,抗體軛合物(特別是堿性磷酸酶復合物)冷凍后可能會失活。
4.凍干粉末
將你的蛋白質脫水凍干成粉末,在冰箱中無限期存放。
優點:蛋白質不會像在水溶液中發生會水解和其他形式的化學降解,凍干蛋白質的空間也比溶液要小,而且可以長期儲存。
缺點:凍干并不適用于所有蛋白質,與細胞膜相關的蛋白質容易被凍干破壞。而且,并非所有的蛋白質都凍干后都能保持穩定性,有的可能會變性,從而減少它們的有用性和再溶解的能力。此外,一些蛋白質可能需要與蔗糖、甘露醇或BSA等才能保持穩定。
六個儲存小技巧:
1.無論是冷凍還是儲存在溶液中,將蛋白進行分裝,以避免凍融,降低污染的風險。
2.低濃度蛋白能更好地與塑料或玻璃結合,將蛋白濃縮至1mg/ml以上,,或添加BSA等減少這種結合。
3.添加乙二醇或甘油等保護劑,使蛋白穩定,防止結冰。。
4.抑制微生物的生長,添加硫柳汞01%(w / v)或疊氮化鈉0.05%(w / v)。
5.添加EDTA 、PMSF等蛋白酶抑制劑來減少蛋白質降解。
6.阻止半胱氨酸氧化,可以加入1-5mM還原劑,例如DTT。