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血清匯總:那些可以忽略卻重要的細節

2021-12-06 11:26 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑

在我們日常的細胞實驗中,總會遇到各式各樣的問題,其中關于胎牛血清(FBS)的問題最多,今天為大家匯總了血清一些常見問題,滿滿的干貨!


那些可以忽略的小卻重要的細節:

1. 血清的保存溫度?

未拆封的血清應保存在-15℃至-20℃,避免反復凍融。拆封后的血清應無菌分裝成適當的用量并存放于 -15 ℃ 至 -20 ℃,2~8 ℃ 溶解后建議一個月內使用。

2. 血清的有效期是多久?

大部分血清效期是 5 年,針對每個批次,請通過質檢文件確定具體效期日期。

3. 血清應如何融解?

血清從冷凍箱取出后,置于2~8℃冰箱使之融解,不時規則地搖晃均勻,充分融解后分裝或使用。

4. 為什么有時血清中出現沉淀?是否需要去除?如何去除?

血清中的白色沉淀主要是脂蛋白、冷凝集素、玻連蛋白、胎球蛋白、磷酸鈣、膽固醇等、絮狀沉淀物主要是纖維蛋白。多種原因可能導致血清中沉淀的形成,最常見的原因之一是融化過程中,脂蛋白聚集所致。該現象一般不會影響產品質量。若需要去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g 稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為血清中的絮狀物會阻塞過濾膜。

5. 血清是否需要做滅活處理?

血清是否需要滅活取決于您的應用。加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養ES 細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。

滅活過程中,會導致血清中某些成分被破壞,如氨基酸,維生素,生長因子等。所以只有在您的實驗對血清有特殊要求時,才會考慮對血清進行滅活處理。如您的實驗對血清中的某種組分敏感,需要去除該組分。最常見的情況是需要去除血清中的補體蛋白,因為補體在機體中參與細胞殺傷,巨噬細胞和淋巴細胞活化,肥大細胞和血小板組胺釋放,平滑肌收縮等過程,所以一般在免疫學相關研究中及肌細胞和干細胞的培養過程中需要對血清進行滅活處理。

6. 如何進行血清滅活處理?

血清請先按上述「血清應如何融解」中的操作步驟融化和混勻,熱滅活時請將血清置于 56 ℃ 水浴 30 分鐘。為盡量減少熱滅活對血清品質的影響,一次滅活的血清體積不宜過大。最好準備同樣的容器裝相等體積的水(與血清相同溫度),滅活時將裝有血清和水的容器同時放入 56 ℃ 水浴, 在裝水的容器中放置溫度計,加熱過程中不時輕輕旋轉混勻血清,當溫度計顯示達到 56 ℃ 左右,開始計時。56 ℃ 水浴后,建議馬上轉移到冰上降溫。

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