中文名稱：Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
英文名稱：Tricine-SDS-PAGE Gel Kit
產品規格：50次
儲存條件：2～8℃
用途：分離分子量在1KD-10 kD的蛋白及多肽,是電泳法變性分離多肽的主要方法
注意事項：主要由Acr-Bis、Tris-HCl、甘油等、APS、TEMED等組成。

簡介：常規的Tris-SDS-PAGE電泳的只能分辨大分子蛋白，對于相對分子量小的，尤其是10 kD以下的蛋白分辨率極低。而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分離分子量在1-10 kD的蛋白及多肽，成為目前電泳法變性分離多肽的主要方法。本產品包括Tricine-SDS-PAGE凝膠制備所需全套試劑，只需自備蒸餾水，即可制備高質量各種濃度的凝膠，方便、快捷，電泳后可直接用于考染、銀染、Western雜交等實驗。

試劑盒組成：
組份    50次
49.5%T 3%C    30ml
49.5%T 6%C    100ml
Tricine-SDS-PAGE Gel Buffer    140ml
Glycerol    30ml
APS    0.5 g
TEMED    750μl

本產品所提供的APS(過硫酸銨)為固體粉末，使用前加入純水溶解即配制成10%APS溶液(0.5 g APS加5ml純水)，將溶液分裝后置于-20℃保存，通常半年內有效。溶液在使用中可放置4℃保存兩周。

注意事項：
1、本產品所提供的APS(過硫酸銨)為固體粉末，使用前加入純水溶解即配制成10%APS溶液(0.5 g APS加5ml純水)，10%APS配制后分裝-20度保存。APS溶液不穩定，應盡量減少室溫存放時間，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若發現凝膠聚合時間延長，應考慮更換，使用-20℃保存的10%APS。
2、在凝膠配制過程中，尤其是液體混勻步驟，應盡量避免氣泡的產生。
3、在分離膠上層加純水時要小心操作，加水時速度不能太快。
4、丙烯酰胺具有神經毒性，操作時請穿著實驗服并佩戴一次性手套。
5、本產品僅用于科研，不能用于人體實驗或人體治療。

操作步驟：
根據目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度，凝膠濃度配方參考附表。

I 配制分離膠
1、將不同體積的純水、49.5%T 6%C、Tricine-SDS-PAGE Gel Buffer和Glycerol(甘油)加入到離心管中混合。
2、加入10%APS和TEMED，立即渦旋混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。
3、在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液(對于1 mm mini-gel，分離膠溶液加約4ml)，然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3 cm的水層，使凝膠表面保持平整。
4、靜置，待分離膠和水層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

II 配制夾層膠
去除覆蓋在分離膠上的水層，用濾紙將殘留的水盡量吸去。
1、將不同體積的純水、49.5%T 3%C和Tricine-SDS-PAGE Gel Buffer加入到離心管中混合。
2、加入10%APS和TEMED，立即渦旋混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。
3、將適量的夾層膠溶液迅速加至分離膠的上面(對于1 mm的mini-gel，夾層膠溶液加約1ml)， 然后在夾層膠溶液上輕輕覆蓋一層水層，使凝膠表面保持平整。
4、靜置，待夾層膠和水層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

III 配制濃縮膠
去除覆蓋在夾層膠上的水層，用濾紙將殘留的水吸去。
1、將不同體積的純水、49.5%T 3%C和Tricine-SDS-PAGE Gel Buffer加入到離心管中混合。
2、加入10%APS和TEMED，立即渦旋混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。
3、將梳子插入凝膠內，避免產生氣泡。
4、待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，以免破壞加樣孔。
5、進行電泳操作。

IV 電泳
將電泳槽放入4℃或冰水浴中，外槽加入陽極緩沖液，內槽加入陰極緩沖液，30V預電泳10 min，將樣品(已經過Tricine專用上樣緩沖液處理)加入點樣孔后30V電泳1小時，100V電泳至溴酚藍到達膠底部后停止電泳，進行后續的考馬斯亮藍染色或電轉。