產品名稱：細胞核蛋白與細胞漿蛋白提取試劑盒
規格：50T/100T
分類：蛋白提取
儲存條件：4℃,12個月
注意事項：裂解細胞提取細胞核蛋白與細胞漿蛋白

一、試劑盒說明  
本試劑盒用于從哺乳動物組織和培養細胞中提取核蛋白和/或胞漿蛋白，提取制備過程簡便。制備的核蛋白和胞漿蛋白能保持天然活性，并且純度較高。提取的蛋白可用于進一步的轉錄因子活性分析、凝膠阻滯實驗(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、酶活性測定等后續蛋白質研究。

操作步驟
Ⅰ實體組織蛋白的提取
1、組織樣本，將組織剪切成小塊，加入適量的冰冷PBS均漿后，靜置5 min ，棄沉淀，小心吸取上清轉移至另一離心管中；
2、上清4℃離心500×g，3 min，棄上清，估計細胞壓積PCV（離心后的緊實細胞體積）；
3、每20μL細胞壓積中，加入200μL預冷的Buffer A【使用前每mL Buffer A加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制劑】，最大轉速渦旋劇烈振蕩15s，放置冰上10～15min；
4、加入11μL冷Buffer B，最大轉速渦旋劇烈振蕩5s，放置冰上1min；
5、再次最大轉速渦旋劇烈振蕩5s后， 4℃離心，16000×g,5min；
6、盡快將上清轉入另一預冷的潔凈微量離心管，置于冰上，即得胞漿蛋白；
7、在離心沉淀物（細胞核）中加入100μL預冷的Buffer C (使用前每mL Buffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制劑)，最大轉速渦旋劇烈振蕩15s，放置冰上40min，每間隔10 min渦旋劇烈振蕩15 seconds；
8、4℃離心，16000×g,,10min，盡快將上清轉入一預冷的潔凈微量離心管，即得核蛋白；
9、上述提取的胞漿蛋白和核蛋白進行蛋白定量（Braford法或BCA法），分裝并保存于-80℃，避免反復凍融。

Ⅱ  培養細胞蛋白提取
1、取培養細胞5×106～1×107個/mL，4℃離心，500×g,3 min收集細胞，棄去培養液，用預冷的PBS洗滌兩遍；
2、用移液槍盡可能取去上清，勿留殘液，估計細胞壓積PCV（離心后的緊實細胞體積）；
3、每20μL細胞壓積中，加入200μL預冷的Buffer A【使用前每mL Buffer A加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制劑】，最大轉速渦旋劇烈振蕩15s，放置冰上10～15min；
4、加入11μL冷Buffer B，最大轉速渦旋劇烈振蕩5s，放置冰上1min；
5、再次最大轉速渦旋劇烈振蕩5s后， 4℃離心，16000×g,5min；
6、盡快將上清轉入另一預冷的潔凈微量離心管，置于冰上，即得胞漿蛋白；
7、在離心沉淀物（細胞核）中加入100μL預冷的Buffer C (使用前每mL Buffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制劑)，最大轉速渦旋劇烈振蕩15s，放置冰上40min，每間隔10 min渦旋劇烈振蕩15 seconds；
8、4℃離心，16000×g,,10min，盡快將上清轉入一預冷的潔凈微量離心管，即得核蛋白；
9、上述提取的胞漿蛋白和核蛋白進行蛋白定量（Braford法或BCA法），分裝并保存于-80℃，避免反復凍融。

注意事項
1、所有的試劑及器具均需預冷后使用；
2、細胞的數量不應少于0.5×107個/mL；，     
3、以上各緩沖液的使用量是以20μL細胞壓積為例。