中文名稱：BCA蛋白定量試劑盒
英文名稱：BCA Protein Assay Kit
產品規格：250次/500次微孔板(50管次)

BCA蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產品是基于BCA(Bicin-choninic Acid)法研制而成，實現了對蛋白質進行快速、穩定、靈敏的濃度測定。其原理是在堿性環境下蛋白質分子中的肽鏈結構能與Cu2+絡合生成絡合物，同時將Cu2+還原成Cu+。BCA試劑可敏感特異地與Cu+結合，形成穩定的有顏色的復合物。在562 nm處有高的光吸收值，顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，可根據吸收值的大小來測定蛋白質的含量。本試劑盒含有牛血清白蛋白(BSA)溶液作為蛋白質標準品溶液，測定范圍為20～2000μg/ml。

試劑盒組成：
組成    規格
BCA-A    2×50ml
BCA-B    3ml
BSA Standard Solution(2mg/ml)    2ml

保存條件：BSA Standard Solution：2～8℃，其它組分：室溫

注意事項：
1、本產品可以采用分光光度計(試管檢測法)或者酶標儀(微孔檢測法)測定蛋白濃度。
2、建議每次測定蛋白樣品時，繪制標準曲線，以獲得準確數據。
3、BSA標準品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致(可用1×PBS或0.9%生理鹽水稀釋)。
4、如待測樣品中含較多的干擾物質(具體見附表1)，可采用Bradford法蛋白定量試劑盒(WE0275)或其他蛋白定量產品。

使用方法：
1、稀釋BSA標準品：用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋BSA標準品。

管號    稀釋液用量(μl)    BSA標準品用量(μl)    BSA標準品最終濃度(μg/μl)
A    0    100    2
B    200    200    1
C    200    200(從B管中取)    0.5
D    200    200(從C管中取)    0.25
E    200    200(從D管中取)    0.125
F    200    200(從E管中取)    0.0625
G    200    0                 0(空白)

2、配置BCA工作液：
1)計算BCA工作液總量：
BCA工作液總量=(BSA標準品樣本個數+未知樣本個數)×復孔數×每個樣本BCA工作液體積
舉例：BSA標準品樣本個數為7個，未知樣本個數2個，復孔數3個。
試管檢測法：
BCA工作液總量=(7個BSA標準品樣本+2個未知樣本)×3個復孔×2ml/每個樣本工作液體積=54ml
微孔檢測法：
BCA工作液總量=(7個BSA標準品樣本+2個未知樣本)×3個復孔×200μl/每個樣本工作液體積=5.4ml
2)根據計算出的BCA工作液需要總量，將BCA-A和BCA-B按照50:1的體積比，配制BCA工作液，充分混勻。
注意：
a. 由于加樣可能存在誤差，建議配制BCA工作液時，多配制1-2個孔。
b. 新配制的BCA工作液室溫密封條件下可穩定保存24小時。

3、定量檢測
①試管檢測法(蛋白濃度檢測范圍：20-2000μg/ml)
1)按上表，將稀釋好的A-G BSA標準品和待測蛋白樣品(原液或稀釋液)各100μl分別加到作好標記的試管中。推薦每個測定的樣本做2-3個平行反應。
2)向每個試管中各加入2ml BCA工作液，充分混勻，37℃水浴中孵育30分鐘 ，將各管冷卻至室溫，須在3-5分鐘內完成檢測。
3)用分光光度計在562 nm處，測定每個樣品及BSA標準品的吸光值，同時做好記錄。
4)繪制標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。
② 微孔檢測法(蛋白濃度檢測范圍：20-2000μg/ml)
1)按上表，將稀釋好的A-G BSA標準品和待測蛋白樣品(原液或稀釋液)各25μl分別加到作好標記的96孔板微孔中。推薦每個測定的樣本做2-3個平行反應。
2)每孔加入200μl BCA工作液，充分混勻，蓋上96孔板蓋，37℃孵育30分鐘，冷卻至室溫，須在3-5分鐘內完成檢測。
3)用酶標儀在540-590 nm范圍內，測定每個樣品及BSA標準品的吸光值，同時做好記錄。
4)繪制標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。

注意：
a. BCA法測定蛋白濃度時，吸光值會隨著時間的延長不斷加深。因此所有樣品測定需在3-5分鐘內完成，否則會影響蛋白定量的準確度。
b. 建議以去除背景值后的吸光值讀數繪制標準曲線。
c. 由于操作誤差導致標準品讀數嚴重偏離線性曲線的應舍去。
d. 未知樣品濃度可以從標準曲線方程中計算得出, 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數。
e. 如果得到的蛋白濃度不在檢測范圍內，請重新稀釋樣品后再次測定。

4、BCA蛋白定量分析結果舉例：
微孔板檢測法結果
蛋白濃度(μg/μl)    原始吸光值    去除背景值后的吸光值
0    0.086(背景值)    0.000
0.125    0.123            0.037
0.25    0.280            0.194
0.5    0.551            0.465
1    1.068            0.982
2    2.000            1.913