產品名稱：pK19mobSacB-T7polymerase原核載體
規格：0.5-2ug質粒干粉
貨號：YM2637

基本信息：
別名:T7polymerase
原核抗性:卡那霉素Kan
篩選標記:自殺基因SacB
克隆菌株:大腸桿菌DH5α
培養條件:LB培養基/37℃

質粒圖譜



擴增流程：
收到產品后，請先根據產品管壁標簽來判斷產品形式，并在擴增前準確查找該質粒的抗性、感受態和培養溫度。
1、質粒干粉（請務必轉化挑單克隆重提后使用）
①收到質粒干粉后請先5000rpm離心1min，再加入20μl無菌水溶解質粒；
②取2μl質粒加至100μl感受態中，冰浴30min后，42℃熱激60s，不要攪動，再冰浴2min；
（從第二步開始均要在超凈工作臺中無菌操作）
③加入500μl無抗的LB液體培養基，180rpm震蕩培養45min；
④取10μl、100μl復蘇液，并分別涂布至目標質粒抗性的LB平板上；
（可使用本平臺的平板涂布專用玻璃珠進行涂布，可以比傳統涂布方法獲得更多轉化子）
⑤將平板正向培養1h，再倒置37度培養16h。如果要求是30度則培養20h；
（如果菌落過多，請將質粒稀釋后再轉化。如果無菌落，請加入10μl質粒離心全涂轉化）
⑥挑取單菌落至LB液體培養基中，加入對應抗生素，220rpm震蕩培養14h，根據實驗需要和質粒提取試劑盒說明書提取質粒。

2、甘油菌：四區劃線后挑單菌落培養，酵母菌需要先液體復蘇再四區劃線，再挑單菌落液體培養。
3、穿刺菌：穿刺接種，液體培養后四區劃線，再挑單菌落液體培養。
4、平板：直接挑取單菌落至液體培養基中。
5、液體質粒：單獨提取的液體質粒收到后可直接使用。