產品名稱：PEG3350溶液(50%,無菌)
規格：100ml/500ml
供應商：上海遠慕生物
分類：細胞培養
儲存條件：室溫,12個月
用途：聚乙二醇誘導細胞融合，可用作融合劑,以獲得生產單克隆抗體的雜交瘤細胞,誘導細胞雜交。也可用于酵母轉化。
注意事項：無菌溶液,由DPBS(pH7.4)和PEG33500或稱聚乙二醇3350組成,經無菌處理。體外培養的單層貼壁細胞或懸浮細胞均可以做融合，但成功概率較大的是單層貼壁細胞。




酵母感受態細胞的制備：
1.活化菌種。-80℃保存的菌種在固體YPDA培養基（YPDA加20g Agar/L）上劃線，在30℃培養2-4天。
2.挑取酵母單菌落在固體YPDA培養基上劃3-5 mm的短線，在30 ℃培養2-4天。待酵母單菌落長至2 mm長時，接種。
3.首先把酵母細胞接種到3 ml液體YPDA培養基中，30℃過夜培養。
4.第二天轉接到含有30 ml液體YPDA培養基的三角瓶中繼續培養，待OD600到0.4-0.5范圍內。收集細胞，1000 g，離心5 min, 去上清。
5.沉淀用30-50 ml的無菌的去離子水懸浮。1000 g，離心5 min，去上清。
6.沉淀用合適體積的100 mM LiAc懸浮（30 ml的酵母菌最多用不超過1 ml的100 mM LiAc懸浮，通常100 μl的酵母細胞用于轉化一個質粒，即一個反應）。
7.把酵母細胞的懸浮液分裝到1.5 ml的離心管中，每管分裝100 μl，用于轉化一個質粒即一個反應。1000 g，離心5 min，去上清。制備好的感受態細胞備用。

酵母轉化：
1.配制預混液，每轉化一個質粒即一個反應需要360 μl的預混液。

50% PEG	240 μl
1 M LiAc	36 μl
Carrier DNA（10 mg/ml）	5 μl
質粒（大約200 ng/μl）	5 μl（根據質粒的濃度加入相應的體積）
總體積	360 μl

2.吸取360 μl的預混液加入到感受態細胞中，用槍頭反復吹吸沉淀，使離心管底的酵母細胞徹底地懸浮在含有PEG的預混液中。
3.放置在30 ℃的水浴鍋中孵育30 min，每10 min混勻一次。
4.放置在42 ℃的水浴鍋中熱擊30 min，每10 min混勻一次。
5.12000 rpm，離心1 min，去掉上清液。
6.沉淀中加入100 μl的無菌的去離子水，懸浮沉淀。
7.把酵母細胞涂到相應的酵母培養基平板上，30℃培養2-4天。


注意事項：
1. 初次使用Carrier DNA，請把裝有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃儲存備用。下次使用時請在冰上解凍Carrier DNA。
2. PEG溶液在低溫環境下會析出，請于常溫環境下完全溶解后使用。
3. 轉化全程要無菌操作。


注意事項
1．避免接觸眼睛、呼吸系統、皮膚；若誤接觸眼睛，立即用水沖洗或向醫生咨詢；
2．由于組織或細胞性質不同，實驗人員應依據具體情況，確定**消化時間；消化細胞時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁和生長狀況；
3．本產品不含抑菌劑，在使用過程中要特別注意無菌操作，避免消化液被微生物污染，大包裝，建議無菌分裝保存；
4.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。



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